产品说明

一般描述

Sigma CRISPR人类激酶混合慢病毒库
sigma-aldrich将其在混合慢病毒筛选方面的长期专业积累与其CRISPR基因组编辑技术结合，建立了强大的新型发现工具：Sigma CRISPR人类激酶混合慢病毒库。该混合库靶向人类蛋白激酶组，可敲低约700个与发育和疾病相关的常见基因，平均每个激酶基因具有9个不同的敲除CRISPR克隆。该慢病毒库可实现对转导细胞的稳定整合、筛选和富集，研究人员对成百上千个激酶基因进行功能性筛选所花费的时间和成本仅为筛选阵列克隆的一小部分。
Sigma CRISPR人类激酶混合慢病毒库使用单个慢病毒载体(pLV-U6g-EPCG)将Cas9、gRNA、1个嘌呤霉素筛选标记物和GFP递送到靶细胞。该载体以可驱动Cas9蛋白表达的、稳定的截断型人类延长因子-1启动子α(tEF1α)和人类U6启动子为特色，可确保gRNA在大部分哺乳细胞中的有效转录。以2A肽(P2A和T2A)为侧翼的Cas9，使嘌呤霉素抗性基因、Cas9和GFP能够按照化学计量比，从单个转录本表达为单个蛋白(见以下载体图谱)。如果您对小分子筛选或典型的发育信号通路感兴趣，Sigma的CRISPR人类激酶混合慢病毒库将为您提供高通量解决方案，帮助您发现只能被敲除筛选实验揭露的新型激酶靶点。

应用

功能性基因组学研究/筛选/靶标验证

特点和优势

使用Sigma CRISPR慢病毒库敲除人类激酶
蛋白激酶是数量最多、研究最充分的基因家族之一。蛋白质磷酸化可介导发育、转录、免疫应答、代谢、凋亡和细胞分化过程中的信号转导，对真核生物的细胞间通讯具有重要作用。激酶的异常调控可引起多种疾病，对这类蛋白质及其功能的研究将有助于发现和开发新疗法。
Sigma CRISPR人类激酶慢病毒混合敲除库包含：

• 6,000多个可表达Cas9和gRNA序列的独特慢病毒克隆，可使近700个人类激酶基因失活(敲除)
• 高克隆覆盖率(每个激酶基因对应7-10个不同的gRNA，平均每个基因对应8.6个)，可提高命中率分析的统计强度
• 大量内在的富集和缺失克隆，使研究人员对实现混合筛选实验结果更自信
• 该库含有100个非靶标对照gRNA，作为标准化参照物
• 利用严格的生物信息学手段建立gRNA设计和拼接，使每个gRNA的脱靶修饰最小化

组分

慢病毒人类激酶库共200 µl，分装为8管，25 ul/管，最低滴度为5x10^8病毒颗粒/ml。

其他说明

该产品仅供研发使用，不可用作药物、家庭使用或其他用途。请查阅安全资料表，获取危险和安全操作规范信息。尽管生产的慢病毒转导颗粒是不可复制的，但仍然建议将其作为生物危害等级2级(RGL−2)生物体在实验室中进行处理。请遵循所有已发表的RGL-2指南，进行实验室废物处理和净化。

原理

Sigma慢病毒CRISPRs
慢病毒颗粒可将表达盒有效转导并整合到分裂和非分裂细胞，如神经元和树突细胞。通过共转染可兼容的包装质粒，生产细胞(HEK 293T)可生成自我失活的复制缺陷型慢病毒颗粒。此外，慢病毒转导颗粒是以水疱性口炎病毒(VSV-G)G糖蛋白为包膜的伪病毒，可转导多种哺乳细胞。

制备说明

每mL的Puro Kill Curve和Determining CFU(克隆形成单位)。
在进行文库规模的筛选前，必须进行2次预实验：(1) 测定靶细胞对嘌呤霉素(杀死曲线)的敏感性，(2) 通过颗粒形成实验(单位为CFU/ml)，测定慢病毒在您的细胞中的功能性滴度。应根据CFU值，对MOI(感染复数)进行计算。不同的细胞具有不同的转导效率，不同慢病毒构建体的作用方式也不同，因此，应在开始混合实验前使用对照CRISPR克隆(Sigma有售)优化实验条件。

法律信息

CRISPR专利正在申请中

基本信息

产品性质

安全信息