产品说明
一般描述
体外转录生成的Cas9 mRNA具有帽子和polyA尾巴结构。该mRNA应该与纯的向导RNA一起使用。使用RNA和质粒构建体,可避免启动子-胚胎兼容性问题以及核酸酶和gRNA表达质粒随机整合到宿主动物基因组的可能性。
应用
功能性基因组学/转基因应用
特点和优势
RNA可立即用于转基因应用。为了介导DNA位点特异性双链断裂,必须与纯的向导RNA序列一起使用。
组分
每管含25ugμg的Cas9 mRNA。
请注意,该产品不含向导RNA序列。向导RNA必须通过定制CRISPR产品选项卡单独购买。
原理
CRISPR/Cas是细菌和古细菌的一种防御系统,可用来对抗入侵的病毒和质粒。来自酿脓链球菌的II型CRISPR/Cas系统包含两种分子元件,即一个Cas9蛋白和一个非编码向导RNA(gRNA),该系统经过基因改造而被用于真核系统中。Cas9核酸内切酶可在单个gRNA的引导下,在指定基因组位置上引入DNA双链断裂(DSB)。与锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB相似,细胞随后会激活内源性DNA修复程序,即非同源性末端接合(NHEJ)或同源重组修复机制(HDR),对目标DSB进行修复。
外形
Sigma Cas9 mRNA的浓度为500 ng/μl(50 μl Cas9 mRNA,具有帽子和polyA尾巴结构)
制备说明
尽管Sigma高质量的RNA合成工艺已成功用于许多基于mRNA的ZFN转基因项目,但是为了确保去除所有可能堵塞显微注射针头的颗粒物,我们仍强烈建议您在进行显微注射前,将最终调整过浓度的CRISPR RNA样品进行离心。
其他说明
为了介导DNA位点特异性双链断裂,必须与纯的向导RNA序列一起使用。
尽管Sigma CRISPR RNA不是针对稳定的细胞培养而开发的,但是,我们已经发现使用RNA形式的CRISPR核酸酶和配对切口酶检测CEL-I活性的一些成功案例。RNA递送系统可能更适用于对双链DNA较敏感的细胞类型(如树突细胞)或启动子与细胞不兼容的情况。
文献中使用的Cas9 mRNA和gRNA标准显微注射浓度范围分别为20-200 ng/μl和10-50 ng/μl。
法律信息
CRISPR使用许可协议
产品性质
质量水平 | 200 |
包装 | vial of 50 μL |
浓度 | 500 ng/μL |
运输 | dry ice |
储存温度 | −70℃ |
安全信息
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 1 |
闪点(F) | Not applicable |
闪点(C) | Not applicable |
Sigma-Aldrich