产品说明
一般描述
Cas9表达质粒使用CMV启动子实现Cas9强瞬时表达。您可以使用MluI和NheI酶切将CMV替换为其它启动子。而且还可使用XbaI酶切将Cas9表达质粒线性化,以实现基于T7的mRNA表达。
应用
功能性基因组学/靶点验证
组分
1管含1µg 的Cas9质粒。
请注意,该产品不含向导RNA序列。向导RNA必须通过定制CRISPR产品选项卡单独购买。
原理
CRISPR/Cas是细菌和古细菌的一种防御系统,可用来对抗入侵的病毒和质粒。来自酿脓链球菌的II型CRISPR/Cas系统包含两种分子元件,即一个Cas9蛋白和一个非编码向导RNA(gRNA),该系统经过基因改造而被用于真核系统中。Cas9核酸内切酶可在单个gRNA的引导下,在指定基因组位置上引入DNA双链断裂(DSB)。与锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB相似,细胞随后会激活内源性DNA修复程序,即非同源性末端接合(NHEJ)或同源重组修复机制(HDR),对目标DSB进行修复。
外形
Sigma Cas9 质粒DNA的产品形式是浓度为20ng/μl的50μl溶液。
制备说明
Sigma CRISPR质粒产品为小量提取包装,可能不适用于转染到特殊类型的细胞中。为得到最佳结果,我们建议在转染前使用无内毒素的DNA纯化试剂盒大量提取质粒。
其他说明
为了介导DNA双链断裂,必须与U6-gRNA质粒一起使用。
文献中使用的标准转染浓度范围为≥1.0 ug/μl且≤5 uL的Cas9质粒结合≥1.0 ug/μl且≤5 ul的U6-gRNA质粒。(上述所有浓度均假设是对0.5~1百万个细胞进行核转染)
法律信息
CRISPR使用授权协议
基本信息
NACRES | NA.51 |
产品性质
质量水平 | 200 |
重组 | expressed in E. coli |
包装 | vial of 50 μL |
浓度 | 20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA) |
启动子 | Promoter name: CMV |
selection | kanamycin |
运输 | dry ice |
储存温度 | −20℃ |
安全信息
储存分类代码 | 10 - Combustible liquids |
闪点(F) | Not applicable |
闪点(C) | Not applicable |
Sigma-Aldrich