产品说明
一般描述
A549 GFP-EGFR 是肺癌,来自于一个 ZFN 修饰的 58 岁男性白种人的上皮细胞,产生了内源性 EGFR 基因位点表达的 EGFR-GFP 转基因。
该细胞系来自 ATCC 产品号:CCL-185。
糖皮质激素是诱导 A549 细胞对 OSM(抑癌蛋白M)、白细胞介素 (IL-6) 和成纤维细胞条件培养基产生应答所必需的。EGFR 基因定位于人类染色体 7p11.2,编码一个 170属于受体酪氨酸激酶 HER 家族的 kDa 受体蛋白。 Egfr 定位于上皮细胞表面。
应用
A549 细胞 GFP-EGFR 是利用 CompoZr ® 锌指核酸酶技术将基因组 EGFR 基因内源性标记绿色荧光蛋白基因 (GFP) 的 A549 细胞系。整合导致内源性表达融合蛋白,其中 GFP 连接到 EGFR 的 C 端。荧光成像显示特征性 EGFR 膜表达。加入 EGF 后,细胞系显示 EGFR 从细胞膜再分布到核内体,使其可用于化合物的高含量筛选。例如,EGFR 的选择性抑制剂 Tyrphostin AG 1478 可消除再分布。该稳定细胞系从单个克隆中扩增。与通过外源启动子过表达的细胞系相比,该靶标的基因调控和相应的蛋白功能得以保留。
特点和优势
锌指核酸酶 (ZFN) 介导的荧光 GFP 标记靶向集成到染色体 7p11.2 上 EGFR 基因的最后一个编码外显子,以创建一个细胞系,该细胞系表现出用 GFP 标记的转基因在蛋白 C 端稳定表达。
这些 A549 细胞可贴壁,倍增时间约为 22 小时。
质量
检测支原体、无菌性、冷冻后活力、细胞系鉴别的短末端重复序列 (STR) 分析、细胞系种属确认的细胞色素氧化酶 I (COI) 分析。
制备说明
媒介更新每周更换两到三次。
通过在 37℃ 水浴中轻轻搅拌(约 2 分钟)快速解冻小瓶,使瓶盖远离水。用 70% 乙醇消毒,加入 9 mL 培养基并离心 125 xg(5-7 分钟)。在完全培养基中重悬,并在 37℃、5% CO2 大气环境中孵育。
传代培养比例:约 1:3-1:6
该细胞系的基础培养基为 RPMI-1640,(产品号:R0883。为制备完全生长培养基,向基础培养基中加入以下组分:胎牛血清, 产品号:F2442 ,至终浓度 (v/v) 10%,L-谷氨酰胺, 产品号:G7513 ,最终浓度为 2 mM。
细胞冷冻培养基-DMSO 1X, 产品号:C6164。
法律信息
CompoZr is a registered trademark of sigma-aldrich Co. LLC
基本信息
NACRES | NA.81 |
产品性质
质量水平 | 200 |
生物来源 | human male lung (Source Disease: Lung carcinoma) |
OMIM登记号 | 131550 |
储存温度 | −196℃ |
Gene Information | human ... EGFR(1956), ERBB1(1956) |
安全信息
储存分类代码 | 10 - Combustible liquids |
WGK | WGK 2 |
闪点(F) | 192.2 °F - closed cup |
闪点(C) | 89 ℃ - closed cup |
Sigma-Aldrich