产品说明

一般描述

由布罗德研究所(Broad Institute)Feng Zhang实验室开发的人类GeCKO v2(一体化载体)文库，包含100,000多个独特的gRNA，用于人类基因组的基因敲除。利用lenti CRISPR一体化的带有嘌呤霉素筛选标记物的Cas9和gRNA共表达载体，与版本1相比，版本2载体可产生10倍以上的高滴度病毒。人类单个载体系统GeCKO文库分装为8管，每管25 ul，最低滴度为5X10^8 TU/ml(由p24试验检测)。GeCKO人类文库被作为2个1/2文库(A和B)进行交付。建议同时对A和B文库进行筛选，从而使每个基因对应6个sgRNA(每个文库提供3个sgRNA)。两个文库均含有1000个非靶标对照sgRNA。A文库也会靶向miRNA(每个miRNA对应4个sgRNA)。

应用

Functional Genomics/Screening /Target Validation

特点和优势

• 使用CRISPR核酸酶敲除蛋白质编码基因，从而可对蛋白质功能进行评估
• 可在实验室中实现对人类全基因组(16,000多个基因)的有效筛选，无需机器人或特殊设备
• 大量内在的富集和缺失克隆，使研究人员对实现混合筛选实验结果更自信
• 慢病毒CRISPR可感染多种不同的哺乳细胞，通过共同表达1个密码子经优化的Cas9核酸酶和1个单导向RNA，促进基因敲除。
• 将人类GeCKO版本2文库的单载体系统用于无法将Cas9转导至人类细胞(如原代细胞)中的应用。
• 转导后，使用嘌呤霉素进行筛选。

制备说明

每mL的Puro Kill Curve和Determining CFU(克隆形成单位)。在进行文库规模的筛选前，必须进行2次预实验。请访问 Sigma.com/pooledscreening。

其他说明

该产品仅供研发使用，不可用作药物、家庭使用或其他用途。请查阅物质安全资料表，获取危险和安全操作规范信息。尽管生产的慢病毒转导颗粒是不可复制的，但仍然建议将其作为生物危害等级2级(RGL−2)生物体在实验室中进行处理。请遵循所有已发表的RGL-2指南，进行实验室废物处理和净化。

法律信息

CRISPR专利正在申请中
All-in-One is a trademark of sigma-aldrich Co. LLC

基本信息

产品性质

安全信息