产品说明

一般描述

FastStart SYBR Green预混液；使用说明

FastStart^™ SYBR^® Green预混液是不含ROX染料的即用型热启动反应混合物，用于在实时PCR系统(LightCycler^®仪器除外)上进行定量聚合酶链式反应(qPCR)和逆转录(RT)-qPCR。该预混液简化了DNA检测和分析反应的试剂制备。搭配实时PCR仪、适当的PCR引物和水解探针，FastStart^™ TaqMan^®预混液可实现对已知DNA序列的灵敏检测和定量。
SYBR^® Green I是一种DNA双链特异性染料。在DNA合成的每个阶段，包含在反应液中的SYBR^® Green I染料可与扩增的PCR产物相结合。扩增子可通过其荧光而被检测到。
热启动的实验方法已证明可显著提高特异性、灵敏度及PCR产量。在FastStart^™ Taq DNA聚合酶的某些氨基酸残基上的热不稳定性封闭基团使得改造过的酶在室温下失活。因此，在引物可以非特异性结合的阶段并没有发生延伸。FastStart^™ Taq DNA聚合酶可在高温(即+95℃的预孵育步骤)下通过将封闭基团去除而激活。
FastStart^™ SYBR^® Green预混液可用于任何DNA或cDNA靶标的扩增和检测，包括GC或AT富含序列。不过用户需根据待用实时PCR仪的反应条件调整检测方案，并针对各目标序列设计特异性引物。
将预混液与我们的Transcriptor第一链cDNA合成试剂盒结合以在两步法qRT-PCR中获得优异结果。

应用

FastStart^™ SYBR^® Green已用于SYBR^® Green I检测形式的qPCR和两步法qRT-PCR反应。它还用于：

• 用于腺相关病毒(AAV)滴度定量的定量聚合酶链式反应(qPCR)
• 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)相关的不同Col6a1-3基因表达水平的检测qPCR
• G蛋白偶联雌激素受体-1(GPER)mRNA的实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)
• 基因表达研究的qRT-PCR

FastStart^™ SYBR^® Green预混液适配除 LightCycler^®仪器以外的任何实时qPCR仪器。

特点和优势

• 提高 PCR 灵敏度和特异性：

依靠这种混合物的 FastStart Taq DNA 聚合酶，通过热启动 PCR 最大限度地减少非特异性扩增产物的形成。

• 避免高估 qPCR 结果：

消除非特异性扩增产物和引物二聚体，增加结合定量的 SYBR Green I 的量。

• 扩增并检测广泛的 DNA 或 cDNA 靶标：

扩增长达 500 bp 的片段，包括富含 GC 或 AT 的片段。适用于 LightCycler ^® 仪器以外的任何实时 PCR 仪器。

• 使用 LightCycler 以外的任何实时 PCR^® 仪器：

从两种制剂中选择——一种含有 ROX 引用染料，另一种不含 ROX。

• 节省 qPCR 制备的时间和精力：

依靠这种易于使用的 2x 主混合物，无需混合组分，滴定 MgCl2 或执行其他耗时的优化步骤。

• 防止携带污染导致的假阳性：

混合物中含有 dUTP，因此可与尿嘧啶-DNA 糖基化酶配合使用，以消除先前 PCR 反应中携带的污染 DNA。

组分

FastStart SYBR Green Master，包含 FastStart Taq DNA 聚合酶、反应缓冲液、核苷酸 (dATP、dCTP、dGTP、dUTP) 和 SYBR Green I 的 2 倍浓缩预混液。

质量

功能测试：使用三个模板对每批样本进行 qPCR 性能测试，即富含 GC 的模板、富含 AT 的模板和长模板(约440 bp)。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
qPCR 靶标
原则上，FastStart SYBR Green Master 可用于任何 DNA 或 cDNA 靶标的扩增和检测，包括富含 GC 或 AT 的靶标。但是，对于每个靶标，你将需要：

• 以使检测方案适应实时 PCR 仪的反应条件，
• 为靶标设计特异性 PCR 引物。

有关一般建议，请参阅实时 PCR 仪器的操作员手册。
有两种可用形式
主混合物有两种形式 - 一种含有 ROX 参比染料，另一种不含 ROX。
防止携带污染
本主混合物包含 dUTP，dUTP 将整合到 PCR 产品中，以帮助防止携带污染导致的假阳性。在随后的 PCR 中，您可以加入尿嘧啶-DNA 糖基化酶来降解任何含尿嘧啶的残留污染物(来自之前 PCR 的扩增产物)。
qRT-PCR
将此主混合物与我们的 Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit 结合，进行两步 qRT-PCR。该试剂盒提供极好的结果，与所有实时 PCR 仪器一起高效工作。

法律信息

FastStart is a trademark of Roche
LightCycler is a registered trademark of Roche
SYBR is a registered trademark of Life Technologies
TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.

产品性质

质量水平	100
用途	sufficient for 500 reactions sufficient for 5000 reactions
特点	dNTPs included: no hotstart
manufacturer/tradename	Roche
包装	pkg of 500 x 20 μL reactions (04673484001) pkg of 5000 x 20 μL reactions (04673492001)
technique(s)	RT-qPCR: suitable qPCR: suitable
input	purified DNA
detection method	probe-based

安全信息

储存分类代码	12 - Non Combustible Liquids
WGK	WGK 1
闪点(F)	does not flash
闪点(C)	does not flash