产品说明
一般描述
从全血中分离 DNA 可能很困难,因为血液是含有细胞、蛋白质、代谢物等的复杂混合物。大多数细胞 (> 99%) 是无细胞核的红细胞(红细胞),因此不具有 DNA。白细胞含有细胞核和 DNA。因此,血液中的 DNA 必须从三种白细胞(单核细胞、淋巴细胞或粒细胞)中分离。
样品材料:
人全血(用肝素钠、EDTA 或柠檬酸钠处理):1 至 10 mL
分离淋巴细胞:1 至 10 mL
分离血沉棕黄层:10 至 20 mL 全血的血沉棕黄层,含有至少 1.0 x 107 个白细胞。
分离 DNA 的纯度:平均 A 260/A 280 比值:1.7-1.9
哺乳动物血液的 DNA 分离试剂盒可快速分离 1-10 mL 哺乳动物全血、淋巴细胞或血沉棕黄层样本中的 DNA。
应用
哺乳动物血液DNA提取试剂盒已被用于从哮喘患者血液中分离基因组DNA,从而用于单核苷酸多态性基因分型。
哺乳动物血液的 DNA 分离试剂盒纯化适合大多数分子生物学应用的 DNA:
特点和优势
组分
质量
对每批试剂盒进行功能检测,以确定其从人全血中纯化 DNA 的能力,随后使用扩增长模板 PCR 系统通过 PCR 特异性扩增 4.8 kb tPA 片段。通过琼脂糖凝胶电泳观察 4.8 kb tPA 产物,并与适当的阳性和阴性对照进行比较。可观察到与阳性对照品强度相当的单一 4.8 kb tPA 条带。还检测了试剂盒缓冲液中是否存在 dna 酶污染。将每种溶液与1μg BR322 DNA在+37℃温育6小时。然后通过琼脂糖凝胶电泳法显示 DNA,并与阳性对照进行比较,以确定是否存在可见的线性或缺口质粒 DNA。
制备说明
哺乳动物血液程序的 DNA 分离试剂盒依赖于通过优先的红细胞溶解从全血中分离白细胞。在存在强阴离子洗涤剂的条件下,白细胞溶解,然后通过脱水和沉淀除去蛋白质。随后通过乙醇沉淀回收纯化 DNA。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
图 1:用哺乳动物血液 DNA 分离试剂盒制备的哺乳动物血液大 DNA 片段的扩增。从两份研究样本中制备 DNA,一份含有 10 mL 人血,另一份含有 10 mL 小鼠血。每份 DNA 制备液的等份试样被用作扩增长模板 PCR 系统扩增多个基因片段的模板。PCR 产物进行凝胶电泳分析。
左面板:从人类样本中扩增出的基因片段
泳道 2、3:从 25 ng DNA 扩增的 tPA 片段 (9.3 kb)
泳道 4、5:从 50 ng DNA 扩增出 tPA 片段 (15 kb)
泳道 6、7:从 100 ng DNA 扩增的β-珠蛋白片段 (23 kb)
泳道 8、9:从 200 ng DNA 扩增的β-珠蛋白片段 (28 kb)
泳道 1、10:DNA 分子量标记物 III
右面板:从小鼠样本中扩增出的基因片段
泳道 2、3:从 330 ng DNA 扩增的 IL-2 基因 (4.2 kb)
泳道 4、5:α-2 从 100 ng DNA 扩增的胶原片段 (5.6 kb)
泳道 6、7:α-2 从 50 ng DNA 扩增的胶原片段 (10.4 kb)
泳道 8、9:α-2 从 100 ng DNA 扩增的胶原片段 (15.4 kb)
泳道 1、10:DNA 分子量标记物 III
图 2:用哺乳动物血 DNA 分离试剂盒制备的各种人血样 DNA 的DNA印迹分析。DNA 是从几个研究样本中制备的,包括含有不同抗凝剂的人血以及淋巴细胞和血沉棕黄层制剂。用 Eco RI 消化各制备液 10μg,通过凝胶电泳分离,并通过DNA印迹法转移至尼龙膜上。用 DIG 标记的 n-ras 探针检测各样本中 n-ras 基因。
泳道 2、3:含柠檬酸钠的血样
泳道 4、5:含肝素的血样
泳道 6、7:含 EDTA 钠的血样
泳道 8、9:血沉棕黄层制备
泳道 10、11:淋巴细胞制备
泳道 1、12:DNA 分子量标记物 VII
结果:每个泳道仅包含预期大小的单一杂交条带。
产品性质
质量水平 | 100 |
manufacturer/tradename | Roche |
包装 | kit of for 25 reactions |
安全信息
象形图 | |
警示用语: | Warning |
危险声明 | H319 |
预防措施声明 | P264 - P280 - P305 + P351 + P338 - P337 + P313 |
危险分类 | Eye Irrit. 2 |
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 1 |
闪点(F) | does not flash |
闪点(C) | does not flash |
Sigma-Aldrich