产品说明
一般描述
该试剂盒利用免疫荧光显微镜检测掺入细胞DNA中的BrdU。它通过 体外 标记细胞或器官培养物或者通过 体内 标记而检测DNA合成,其中必须在固定前制备冷冻或石蜡包埋的组织切片。
通常,只有通过DNA变性才能实现抗体的结合。通常,将细胞暴露于酸、碱或加热可使DNA变性。然而,这些步骤会破坏细胞完整性,包括细胞形态以及表面和细胞质标记物。
BrdU标记和检测试剂盒I能够避免这些问题的发生。抗体制剂含有特异性核酸酶,其在使用酸性乙醇固定后可以接近BrdU。因此,也可以同时检测其他标记物(双重染色)。
特异性
BrdU单克隆抗体与5-溴-2′-脱氧尿苷发生特异性结合,并表现出与5-碘-2′-脱氧尿苷(10%)的交叉反应性。BrdU抗体与5-氟-2′-脱氧尿苷或任何内源细胞组分(如胸苷或尿苷)无交叉反应性。
应用
用乙醇固定以BrdU预标记的样本,然后使用BrdU单克隆抗体孵育。试剂盒提供的BrdU抗体含有优化的核酸酶混合物。这些核酸酶产生的单链DNA片段能够与BrdU抗体结合,同时不破坏细胞形态。加入荧光素标记的小鼠免疫球蛋白抗体,然后与BrdU抗体结合。随后,使用免疫荧光显微镜评价样本。
包装
1个试剂盒包含5个组分
制备说明
通过监测掺入细胞DNA的放射性同位素[3H]-胸苷并进行放射自显影检测,可对细胞增殖进行研究。或者,可以使用5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU)代替胸苷。使用BrdU单克隆抗体以及酶或荧光染料偶联的二抗,能够轻松检测到DNA已掺入BrdU的细胞。
工作溶液:BrdU标记培养基
使用无菌细胞培养基按1:1000稀释BrdU标记试剂(终浓度10μM)。
注:对于体内标记,需要使用未稀释的BrdU标记试剂(1-2ml/100g体重)。
临用前配制。
BrdU抗体工作溶液
使用孵育缓冲液按1:10稀释BrdU抗体溶液。
临用前配制。
抗小鼠Ig抗体-荧光素储溶
将抗小鼠Ig抗体-荧光素溶液溶解于1 ml双蒸水中。
抗小鼠Ig抗体-荧光素工作溶液
用PBS按1:10稀释抗小鼠Ig抗体-荧光素储溶。如果需要长期储存,则加入BSA(牛血清白蛋白),10 mg/ml。
临用前配制。
洗涤缓冲液
使用双蒸水按1:10稀释洗涤缓冲液浓缩液(10x)(2号瓶)。
储存条件(工作溶液):BrdU标记培养基
将未稀释(1000x)培养基分装并保存在-15至-25℃下。
BrdU抗体工作溶液
未稀释抗体保存在-15至-25℃下。
抗小鼠Ig抗体-荧光素储液
可在2至8°下稳定保存。
洗涤缓冲液
可在2至8°下稳定保存。
样本材料:细胞培养:贴壁细胞,悬浮细胞,器官或外植体培养物。组织切片(经BrdU 体内 标记后)。
其他说明
仅用于生命科学研究。不用于诊断操作。
产品性质
质量水平 | 100 |
用途 | sufficient for ≤100 tests |
包装 | kit of 1 (5 components) |
manufacturer/tradename | Roche |
technique(s) | immunofluorescence: suitable |
运输 | dry ice |
储存温度 | −20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
货号 | 组份 |
BrdU Labeling Reagent, sterile 1,000x concentrated | |
Washing Buffer concentrate 10x concentrated | |
Incubation Buffer | |
Anti-BrdU antibody, contains nucleases for DNA denaturation | |
Anti-mouse-Ig-fluorescein antibody |
安全信息
象形图 | |
警示用语: | Warning |
危险声明 | H315 - H317 - H319 - H412 |
预防措施声明 | P261 - P264 - P273 - P280 - P333 + P313 - P337 + P313 |
危险分类 | Aquatic Chronic 3 - Eye Irrit. 2 - Skin Irrit. 2 - Skin Sens. 1 |
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 2 |
闪点(F) | does not flash |
闪点(C) | does not flash |
Sigma-Aldrich