产品说明
一般描述
Dpn I需要腺嘌呤残基甲基化才能发挥活性,因此只能消化包含N6-甲基腺嘌呤的GmATC序列。这样的甲基化序列是由dam甲基化酶产生的。甲基化的这种要求将Dpn I与Mbo I和Sau3A I区分开来,其中Mbo I的活性会被dam甲基化所抑制,Sau3A I不会受到甲基化的影响。并且,Dpn I在识别序列上的切割位点也与Mbo I和Sau3A I不同。
同裂酶
该酶是Bsp143 I、Dpn II、Mbo I、Nde II和Sau3A I的同裂酶。
甲基化敏感性
如果不存在6-甲基腺嘌呤,该酶仅在指定位点(*)处出现5-甲基胞嘧啶时发生抑制。
典型的连接和再切割检测
将通过完全消化1μg pBR322 DNA所获得的Dpn I片段在+4℃下与1U T4 DNA连接酶在10μl含有66mM Tris-HCl、5mM MgCl2、5mM二硫苏糖醇、1mM ATP、pH 7.5(在+ 20℃时)的缓冲液中连接16小时。可连接并随后用Dpn I重新切割的产物的百分比(产生pBR322×Dpn I片段的典型模式)已在分析证书的“Lig”和“Rec”下列出。
特异性
识别位点:GmAT * C
GmAT * C
限制性切割位点:GmA↓T*C
GmA↓T*C
热灭活:在65℃孵育15分钟后Dpn I未失活。
应用
在PCR介导突变中,DpnI核酸酶已被用于PCR后的野生型DNA的消化。
质量
缺乏非特异性内切核酸酶活性
将1μg pBR322 DNA 与过量的Dpn I一起在50 μl SuRE/Cut 缓冲液H中孵育16小时。分析证书提供了不改变酶特异性模式的酶单位数量。
缺乏核酸外切酶活性
将大约5 μg [3H]标记的小牛胸腺DNA与3 μl Dpn I一起溶于总体积为100 μl的50mM Tris-HCl溶液(含10 mM MgCl2、1mM二硫赤藓糖醇,pH约7.5)中,并在+ 37℃下孵育4小时。根据分析证书所述,在这些条件下,检测不到放射性释放。
相容性
Dpn I可生成具有与任何钝端相容的钝端片段。
DNA图谱分析
不同DNA上的切割位点数
单位定义
在+37℃,总体积为25 μl的(1x)SuRE/切割缓冲液A中,一个单位表示在1个小时内裂解1μg pBR322 DNA的酶活性。由于pBR322 DNA的完全Dpn I消化需要完全甲基化的GATC序列,因此在活性测定过程中可能会观察到< 5%的部分消化条带。
分析说明
在PCR缓冲液中的活性:100%
在PCR混合液(Taq DNA聚合酶缓冲液)中的相对活性为100%。PCR混合液含有λDNA、引物、10mM Tris-HCl(pH 8.3,20℃)、50mM KCl、1.5mM MgCl2、200 μM dNTP、2.5 U Taq DNA聚合酶。该混合液可用于25个扩增循环。在Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合液的反应缓冲液中的活性为100%。Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合液不在美国出售。
SuRE/Cut 缓冲液系统
推荐使用 加粗 缓冲液以获得最佳活性
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
产品性质
质量水平 | 100 |
生物来源 | bacterial (Diplococcus pneumoniae) |
形式 | solution |
包装 | pkg of 1,000 U (10742988001 [10 U/μl]) pkg of 200 U (10742970001 [10 U/μl]) |
manufacturer/tradename | Roche |
参数 | 37 ℃ optimum reaction temp. |
运输 | dry ice |
储存温度 | −20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
货号 | 组份 |
Enzyme Solution | |
SuRE/Cut Buffer A 10x concentrated |
安全信息
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 1 |
闪点(F) | does not flash |
闪点(C) | does not flash |
Sigma-Aldrich