产品说明
一般描述
比色酶免疫测定法，可用于通过将地高辛和生物素标记的dUTP掺入DNA中来定量测定逆转录病毒的逆转录酶活性。
应用
逆转录酶检测法设计用于定量测定细胞培养物和其他生物样品中的RT活性。该检测方法可用于确定逆转录病毒在培养中的哺乳动物细胞(经逆转录病毒感染的)中的增殖。该检测也可用于RT抑制剂的体外筛选。
包装
1个试剂盒包含14种组分。
产品规格
逆转录酶(RT)活性的测定已广泛应用于逆转录病毒繁殖的体外测试。早期原病毒DNA的合成需要RT，因此其是抗逆转录病毒治疗的主要靶标(例如在获得性免疫缺陷综合症(AIDS)中)。逆转录酶通常使用与各种引物复合的RNA作为DNA合成的模板。为了检测或定量RT活性，传统上通常对掺入的放射性标记核苷酸进行定量。
检测时间：大约4小时(对于1小时的酶反应来说)，大约18小时(对于15小时的酶反应来说)。
样品材料：细胞培养上清液和其他生物样品、RT抑制剂。
灵敏度：逆转录酶检测可在1小时反应中检测到20pg HIV-1逆转录酶。可以在过夜反应中检测到1pg。
该检测方法可检测天然或重组逆转录病毒的逆转录酶活性，包括HIV-1、HIV-2、SIV-1、AMV和M-MulV的活性。
原理
逆转录酶检测，比色法，利用逆转录酶合成DNA的能力[使用杂合poly(A)x oligo(dT)15作为模板和引物]。其可避免使用标准RT测定中所使用的[3H]-或[32P]-标记的核苷酸。代替放射性标记的核苷酸，以优化的比例将地高辛和生物素标记的核苷酸通过RT活性掺入相同的DNA分子中。试剂盒中提供有模板/引物杂交体，但是由于检测的灵活性，其允许使用自选的模板(例如病毒模板)。以合成的DNA作为RT活性参数，根据夹心ELISA实验方案对DNA进行检测和定量：生物素标记的DNA结合至链霉亲和素包被的微孔板模块的表面。在下一步中，加入与过氧化物酶缀合的地高辛抗体(抗-DIG-POD)，并与地高辛标记的核苷酸进行结合(经Institute Pasteur许可)。最后，加入过氧化物酶底物ABTS。过氧化物酶可催化底物的裂解以产生有色反应产物。使用微孔板(ELISA)读数器对样品的吸光度进行测定，其与样品中的RT活性水平直接相关。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
产品性质
| 质量水平 | 100 |
| 用途 | sufficient for ≤200 tests |
| 包装 | kit of 1 (14 components) |
| manufacturer/tradename | Roche |
| technique(s) | enzyme immunoassay: suitable |
| 运输 | dry ice |
| 储存温度 | −20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
| 货号 | 组份 |
| HIV-1 Reverse Transcriptase | |
| Incubation Buffer | |
| Nucleotides | |
| Template/Primer Hybrid | |
| Lysis Buffer | |
| Anti-Digoxigenin-POD antibody | |
| Washing Buffer Concentrate 10x concentrated | |
| Conjugate Dilution Buffer | |
| Substrate Buffer | |
| ABTS Substrate | |
| Substrate Enhancer | |
| Microplate Modules, precoated with streptavidin | |
| One Strip Frame (for 8-well microplate modules) | |
| Cover Foils for Microplates |
安全信息
| 象形图 |  |
| 警示用语： | Warning |
| 危险声明 | H317 - H319 - H412 |
| 预防措施声明 | P261 - P273 - P280 - P333 + P313 - P337 + P313 - P362 + P364 |
| 危险分类 | Aquatic Chronic 3 - Eye Irrit. 2 - Skin Sens. 1 |
| 储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
| WGK | WGK 2 |
| 闪点(F) | Not applicable |
| 闪点(C) | Not applicable |
Sigma-Aldrich
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