产品说明
一般描述
样品材料
DNA插入转录载体pSPT18或pSPT19中。模板DNA必须在转录反应前用合适的限制酶进行线性化，以获得具有确定长度的转录物。使用完整的质粒DNA作为转录模板将会产生具有多个质粒长度的异质转录物。
特异性
热灭活：通过加入2μl 0.2MEDTA(pH8.0)和/或加热至65℃ 10分钟来终止反应。
应用
通过SP6和T7聚合酶的 体外转录，对RNA进行放射性或非放射性标记的便捷试剂盒。该试剂盒也可用于“冷”转录检测。通过体外转录方法产生已知长度的单链RNA探针，其可用于多种杂交技术。
用于对克隆于SP6或T7启动子下游的DNA序列进行体外转录。可以使用放射性(例如，32P、3H、35S)标记的或非放射性的(例如，洋地黄毒苷或生物素)标记的核糖核苷酸以高效率(60-70％掺入)合成均一标记的RNA。标记的转录本适用于所有DNA和RNA杂交技术，也可用于基因组测序和S1核酸酶研究。使用SP6/T7系统可以合成大量高纯度的RNA。这些转录本可用于RNA加工系统的研究。合成的RNA可以在注射到卵母细胞后在体外或体内进行翻译。通过引入“反义”-RNA可以抑制确定的mRNA的转录。通过引入帽结构可以显著增加合成mRNA的体内 翻译效率。
包装
1个试剂盒包含12种组分。
原理
将DNA插入转录载体pSPT18或pSPT19的多接头位点；这两个载体的区别仅在于它们的多接头区域的方向。SP6和T7 RNA聚合酶的启动子位于多接头的任一侧。SP6和T7 RNA聚合酶可分别特异性地转录SP6或T7启动子下游的DNA序列。多接头区域内的克隆插入物可从任一启动子开始转录。第一条DNA链可以用SP6 RNA聚合酶进行转录，而另一条链可用T7 RNA聚合酶进行转录。还可以通过以相反方向将相同的DNA插入pSPT18和pSPT19，并仅用一种RNA聚合酶对第一条和相反的另一条链进行转录。SP6和T7 RNA聚合酶使用克隆的DNA作为模板，并在Mg2+和核糖核苷三磷酸存在下合成互补RNA。亚精胺可促进酶活性。当使用放射性(例如，32P，3H，35S)或非放射性(例如，地高辛或生物素)标记的核糖核苷酸三磷酸时，可获得特异性标记的转录物。
制备说明
工作溶液：标准标记检测
ATP、GTP、UTP混合物
通过制备溶液4、溶液6和溶液7的1:1:1混合物来制备ATP、GTP、UTP混合物。
用地高辛-11-UTP进行转录分析
ATP、GTP、CTP混合物1
以1:1:1混合ATP(瓶4)、CTP(瓶5)和GTP(瓶6)。
UTP/DIG-11-UTP混合物
将地高辛-11-UTP (6 mM)与UTP(瓶7)1:1混合，并作为一份加入混合物1中。
“冷”转录
ATP、GTP、CTP、UTP混合物
通过将瓶4、5、6和7中的溶液以1:1:1:1的比例组合来制备该混合物。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
产品性质
| 质量水平 | 100 |
| 用途 | sufficient for 2 x 20 assays (stadard transcription) |
| 包装 | kit of 1 (12 components) |
| manufacturer/tradename | Roche |
| technique(s) | DNA sequencing: suitable hybridization: suitable |
| 运输 | dry ice |
| 储存温度 | −20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
| 货号 | 组份 |
| pSPT18 DNA 0.25 mg/ml | |
| pSPT19 DNA 0.25 mg/ml | |
| Control DNA, (pSPT18- and pSPT19-neo-DNA, cleaved with Eco RI) 0.5 mg/ml | |
| ATP, in Tris buffer 10 mM | |
| CTP, in Tris buffer 10 mM | |
| GTP, in Tris buffer 10 mM | |
| UTP, in Tris buffer 10 mM | |
| Transcription Buffer 10x concentrated | |
| DNase I, RNase free, in buffer with 50% glycerol | |
| RNase Inhibitor, in buffer with 50% glycerol | |
| SP6 RNA Polymerase, in buffer with 50% glycerol | |
| T7 RNA Polymerase, in buffer with 50% glycerol |
安全信息
| 象形图 |  |
| 警示用语： | Warning |
| 危险声明 | H319 |
| 预防措施声明 | P264 - P280 - P305 + P351 + P338 - P337 + P313 |
| 危险分类 | Eye Irrit. 2 |
| 储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
| WGK | WGK 2 |
| 闪点(F) | does not flash |
| 闪点(C) | does not flash |
Sigma-Aldrich
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