产品说明

一般描述

一种重组逆转录酶，用于在热循环仪和实时PCR仪器上进行两步RT-PCR，以稳定转录最高达14 kb的RNA片段。
在逆转录病毒中，如人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)，逆转录酶是核心酶。HIV-1 RT由两个亚单位66 kDa和51 kDa(p66和p5l组成)。一种HERV-K家族的人类内源性逆转录病毒，可编码逆转录(RT)酶。

应用

Transcriptor逆转录酶设计用于使用传统热循环仪和实时PCR仪器(例如LightCycler^®仪器)转录各种来源的RNA(mRNA、总RNA、病毒RNA,以及体外-转录RNA)，用于以下应用：

• 合成第一链cDNA用于后续扩增反应
• 富含GC的RNA模板的RT-PCR
• cDNA合成期间Cy3、Cy5、DIG、生物素和氨基烯丙基标记
• 根据RACE检索和克隆mRNA的第5′端和第3′端
• 带大量嵌入物的cDNA文库的生成
• DNA双脱氧测序
• RNA测序
• DNA片断3′端标记
• 用于基因组足迹的单链探针的生成
• 人类乳突病毒E6的RNA、皮层和纹状组织、贝克肌营养不良样本的肌肉活检以及卵母细胞和人类大脑微血管内皮细胞(hCMVEC)的miRNA的逆转录。

生化/生理作用

人类免疫缺陷病毒1型逆转录酶(HIV-1 RT)对于将单链病毒RNA催化转化为整合到宿主细胞染色体中的双链线性DNA至关重要。

特点和优势

• 实现两步RT-PCR的高度灵敏度。

转录器逆转录酶用于常规热循环仪和实时PCR仪器(例如，LightCycler^®仪器)。

• 获取更多全长转录本，最大14 kb。

可以生成带有大插入片段的cDNA文库。

• 反向转录困难的模板。

该酶在高温下工作良好，从而克服了RNA二级结构(如富含GC的RNA模板)，有利于优化反应条件。

• 高效标记cDNA。

在cDNA合成过程中纳入Cy3-、Cy5-、DIG-、生物素或氨基烯丙基标记的核苷酸。

组分

• 转录组逆转录酶，在储存缓冲液中
• 转录组RT缓冲液，5倍浓缩

质量

每批逆转录酶都在逆转录聚合酶链反应中进行常规功能测试：

• 用传统的热循环仪检测来自人类肌营养不良蛋白基因的10kb片段，从人类骨骼肌总RNA开始
• 用LightCycler^®仪器检测5 x 10²至5 x 10⁶副本的体外-转录人群PBGD RNA。结果以固定交叉点和固定荧光强度来定义。

制备说明

体积活度：20 U/μl。
较长、罕见或困难的RNA靶的转录
逆转录酶推荐用于以下方面的RT-PCR：

• 长靶，因为它可以转录高达14 kb的RNA模板
• 罕见靶，因为它具有高度灵敏度
• 富含GC的靶，因为它可以在高温(高达+65^oC)条件下工作，以消除与大量二级结构相关的问题

许多应用的标记
转录组逆转录酶也被推荐用于制备标记的cDNA，因为它接受多种修饰的核苷酸(包括Cy3、Cy5、DIG、生物素或氨基烯丙基标记的dNTP)。
反应要求
转录者接受ssRNA和ssDNA模板，并要求转录引物。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

法律信息

LightCycler is a registered trademark of Roche

产品性质

质量水平	100
用途	sufficient for 25 reactions sufficient for 50 reactions sufficient for 500 reactions
特点	dNTPs included: no hotstart: no
manufacturer/tradename	Roche
包装	pkg of 200 reactions (03531287001) pkg of 25 reactions (03531317001) pkg of 50 reactions (03531295001)
technique(s)	RT-PCR: suitable RT-qPCR: suitable
detection method	probe-based

安全信息

储存分类代码	12 - Non Combustible Liquids
WGK	WGK 1
闪点(F)	does not flash
闪点(C)	does not flash