产品说明
一般描述
Tth DNA聚合酶是从嗜热真细菌Thermus thermophilusHB8中分离出来,纯化后没有非特异性脱氧核糖核酸酶和核糖核酸酶。这种酶是一种进行性5′-3′DNA聚合酶,没有3′-5′核酸外切酶活性。该酶在大约pH9(+25℃调整),温度+75℃时活性最高。它在高温(95℃)延长反应中依然保持活性。
应用
嗜热菌(Thermus thermophilus)(Tth)DNA聚合酶能用于:
生化/生理作用
嗜热菌(Thermus thermophilus)(Tth) DNA聚合酶是一种具有热稳定性的DNA聚合酶,有逆向转录酶活性。此酶是高度进行性的5′-3′DNA聚合酶,缺乏3′-5′核酸外切酶活性(校对)。 内在的逆向转录酶(RT)活性在镁离子存在的条件下,转录效率高远高于大肠杆菌DNA聚合酶I和Taq DNA聚合酶的转录效率。RT 活性和核酸酶H活性无关。Tth DNA聚合酶在较高的温度范围(最佳范围+55℃到+70℃,最高温度+95℃)依然有活性,克服了RNA二级结构问题。生成的cDNA在Mg2+存在的情况下,可通过相同的酶进行PCR扩增。Tth DNA聚合酶能够在较高的温度范围进行逆向转录和DNA扩增,因此可用于对细胞和病毒RNA进行定量RT-PCR、克隆和基因表达分析。Tth DNA聚合酶可用于最多1kbRNA RT-PCR扩增。
特点和优势
Tth DNA聚合酶:
包装
1个试剂盒包含3个组分
质量
每一批次的Tth DNA聚合酶均在活化的DNA上进行了活性分析。我们使用λDNA和人类基因组DNA进行功能测试。使用小鼠全RNA和β-actin的特异性引物开展RT/PCR分析。针对每一批次的Tth DNA聚合酶,我们均按照当前质控流程进行检验,确保其中不存在外切核酸酶和内切核酸酶活性,以及具有切割活性的污染物。依照当前的质控流程,我们还采用了一套独特的自启动检测来确保产品中不存在DNA污染。
单位定义
一单位Tth DNA聚合酶的定义为,在+70 ℃下,在30分钟时间内将10 nmol总dNTP催化整合为酸性可沉淀DNA所需的酶量,这一检测条件在“单位检测”中有具体说明。
单位检测:孵育缓冲液,用于分析活化的DNA
67 mM Tris-HCI, pH 8.8 (+25 ℃), 16.6 mM (NH4)2SO4,6.7 mM MgCl2,10 mM 2-巯基乙酸,dATP,dCTP,dGTP,dTTP 每种0.2mM。
孵育步骤
在+70 ℃下,将12.5 μg 激活的鲱鱼精子DNA和0.1 μ Ci [α32P] dCTP与0.01至0.1 个单位的Tth DNA聚合酶在50 μl孵育缓冲液中共同孵育(有石蜡油保护)30分钟。
随后通过三氟乙酸沉淀法和闪烁计数来确定整合的dNTP量。
体积活性:单一PCR(经优化)反应需0.5至5 U
单次PCR(标准)反应需2.5 U
激活DNA分析的测定结果在“单位检测”部分中进行描述。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
法律信息
本产品的使用受到美国专利及其对应的境外专利声明保护。购买本产品,即相当于依照境外的专利声明获得了一份受限制、不可转让的使用许可,即将此等数量的产品仅用于购买者′内部的研究用途。不享受任何其他专利权利。无权进行任何商业活动,包括无批准报告购买者使用结果,免费使用等。不能给出任何商业暗示。禁止反言。本产品仅适合于研究用途。如需用于Roche专利许可的诊断用途,需要获得一份独立的Roche许可。有关购买许可的更多信息,可联系Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA获取。
基本信息
酶学委员会(EC)编号 | 2.7.7.7 ( BRENDA | IUBMB ) |
产品性质
用途 | sufficient for ≤200 reactions |
质量水平 | 100 |
包装 | pkg of 500 U (2 x 250_U) |
manufacturer/tradename | Roche |
参数 | 75 ℃ optimum reaction temp. |
最佳pH | ~9.0 (25 ℃) |
运输 | dry ice |
储存温度 | −20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
货号 | 组份 |
PCR Buffer, including MgCl2 10x concentrated | |
RT-PCR Buffer, coupled reaction in one tube 5x concentrated | |
Mn(OAc)2-Solution 25 mM |
安全信息
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 1 |
闪点(F) | does not flash |
闪点(C) | does not flash |
Sigma-Aldrich