产品说明

一般描述

热不稳定性的尿嘧啶-DNA糖基化酶含有于海洋细菌BMTU 3346中发现的同名酶。和来自大肠杆菌的UNG类似，它可水解单链或双链DNA中的尿嘧啶-糖苷键、切除尿嘧啶并在DNA中产生碱敏感的无碱基位点。这些无碱基位点可通过核酸内切酶、加热或碱处理进行水解。根据DNA制备方式，尿嘧啶-DNA糖基化酶可用于实现常见的位点特异性或链特异性U-DNA切割。该酶表现出较低的热稳定性，因此更容易使其失活。

酶特性
BMTU 3346酶比来自大肠杆菌的相应酶(+95℃下10分钟)失活更快(+95℃下2分钟)。目前已有报道表明，来自大肠杆菌的UNG会保留部分活性，从而导致含有dU的PCR产物降解。与之相反，热不稳定性的UNG可至少在+2至+8℃孵育数小时而不降解dU-PCR产物。因此，在完成扩增后，不再需要将PCR产物立即冷冻或在 -70℃保持反应混合液。

特异性

• 尿嘧啶-DNA糖基化酶可在单链和双链DNA上的U-DNA位点水解尿嘧啶糖苷键、切除尿嘧啶并在DNA中产生碱敏感的无碱基位点。
• 该酶对于单链DNA和双链DNA均具有活性。
• 尿嘧啶-DNA糖基化酶对于RNA以及天然不含尿嘧啶的DNA不具有活性。
• 由于尿嘧啶-DNA糖基化酶没有金属离子的要求，它在EDTA存在情况下依然具有完全的活性。

应用

尿嘧啶-DNA糖基化酶可用于在已掺入脱氧尿苷酸残基的任何位点切割DNA。由于尿嘧啶-DNA糖基化酶的热不稳定性，该酶的主要应用是预防PCR中的残留污染。这与来自大肠杆菌的酶相反；使用了这种UNG制剂就不必在扩增后立即冷冻PCR产物或将反应混合物保持在+ 70℃。

重要提示：对于实时PCR等高灵敏度技术，我们建议选用我们针对该应用优化的的LightCycler^®尿嘧啶-DNA糖基化酶。

特点和优势

• 防止PCR残留污染。
• 提高位点定向突变生成过程的效率。
• 标记寡核苷酸探针。
• 因具有更低的热稳定性而比相应来自大肠杆菌的酶可实现更快的失活。
• 在+2至+8℃孵育至少数小时内不会降解dU-PCR产物。

质量

功能检测：通过在扩增反应前添加约105 dU(含模板)，测定残留活性。UNG处理后，未检测到扩增产物。
根据目前的质量控制程序，该酶不含任何污染性活性外切或内切核酸酶，同时无RNase活性。

单位定义

一个单位的定义是在+37 ℃ 60分钟内完全降解1 μg 纯化的单链含尿嘧啶DNA(噬菌体M13，生长于大肠杆菌 CJ236 dut-ung-)所需的尿嘧啶-DNA糖基化酶量。
一个Lindahl单位的定义是在+37 ℃ 1分钟内释放1 mol尿嘧啶所需的酶量。一个Lindahl单位相当于520 000个我们所定义的单位。

体积活度：1 U/μl

其他说明

用于常规实验室用途。

法律信息

LightCycler is a registered trademark of Roche

基本信息

产品性质

安全信息