Xba I

产品说明

一般描述

Xba I可识别序列T↓*CTAGA并产生具有 5′-粘性末端的片段。该酶在切割位点之前，需要目标序列周围至少有两个核苷酸。

相容末端
Xba I末端与Avr I、Nhe I和Spe I生成的片段相容。

同裂酶
尚不清楚该酶是否具有同裂酶。

甲基化敏感性
DNA的Xba I消化受到大肠杆菌的dam基因产物的抑制，该基因产物使GATC序列中腺嘌呤的6N位置甲基化。在识别序列的标注位点 (*) 上的5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶也能抑制该酶活性。

在SuRE/Cut缓冲液体系中的活性
建议使用粗体印刷的缓冲液以获得最佳活性：
A B L M H
100% 75-100% 75-100% 75-100% 100%

在完全PCR混合液中的相对活性
在PCR混合液(Taq DNA聚合酶缓冲液)中的相对活性为60％。PCR混合液含有?DNA、引物、10mM Tris-HCl(pH 8.3，+20℃)、50mM KCl、1.5mM MgCl2、200 ?M dNTP、2.5 U Taq DNA聚合酶。该混合液可用于25个扩增循环。在Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合液的反应缓冲液中的活性为25％。当补充GC-RICH溶液时，活性增加至100％。

孵育温度
+37℃


不同DNA的切割位点数量
λ Ad2 SV40 ?X174 M13mp7 M13mp18 pBR322 pBR328 pUC18
1 5 0 0 0 1 0 0 1

经PFGE测试
Xba I已经过脉冲场凝胶电泳(在细菌染色体上)测试。对包埋在PFGE分析用琼脂糖中的基因组DNA(大肠杆菌C 600)进行切割时，我们建议每 ?g DNA使用10 U酶，孵育时间约为4小时。

连接和再酶切测定
将通过完全消化1 ?g pUC18 DNA获得的Xba I片段与10 ?l的1U T4 DNA连接酶连接，连接方法是在66 mM Tris-HCl溶液(含 5 mM MgCl2、5 mM二硫苏糖醇、1 mM ATP，在+20℃下pH 7.5)中在+ 4℃下孵育16小时，得到pUC18 DNA回收率高于90％。
随后用Xba I重新酶切，得到高于95%的典型pUC18×Xba I片段。

特异性

星号活性
在低离子强度下或向孵育混合液中添加甘油、乙醇或DMSO，会降低Xba I的序列特异性。
识别位点：TCTAGA
TCTAGA
限制性位点：T↓CTAGA
T↓CTAGA
热灭活：通过在65℃温育15分钟(最多15 U/μg DNA)，可将Xba I热灭活。这些条件不能使较高浓度的Xba I完全热灭活。

应用

限制酶Xba I已被用于基因组DNA的消化。

DNA图谱分析

不同DNA的切割位点数量

• λ：1
• φX174：0
• Ad2：5
• M13mp7：0
• pBR322：0
• pBR328：0
• pUC18：1
• SV40：0

单位定义

一个酶活性单位是指在+37 ℃下，在总体积为50 μl的(1x) SuRE/Cut 缓冲液 H中，在一小时内完全裂解1 μg λdam^– DNA所需的酶量。

分析说明

SuRE/Cut 缓冲液体系
建议使用粗体印刷的缓冲液以获得最佳活性

• A：100%
• B：75-100%
• H：100%
• L：75-100%
• M：75-100%

在PCR缓冲液中的活性：60％

在PCR混合液(Taq DNA聚合酶缓冲液)中的相对活性为60％。PCR混合液含有λDNA、引物、10mM Tris-HCl(pH 8.3，20℃)、50mM KCl、1.5mM MgCl₂、200 μM dNTP、2.5 U Taq DNA聚合酶。该混合液可用于25个扩增循环。在Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合液的反应缓冲液中的活性为25％。当补充GC-RICH溶液时，活性增加至100％。Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合液不在美国出售。
无非特异性核酸内切酶活性
将1μg λDNA 与过量的Xba I一起在50 μl SuRE/Cut 缓冲液H中孵育16小时。分析证书提供了不改变酶特异性模式的酶单位数量。

无核酸外切酶活性
将大约5 μg [3H]标记的小牛胸腺DNA与3μl Xba I一起溶于总体积为100 μl的50mM Tris-HCl溶液(含10 mM MgCl 2、1mM二硫赤藓糖醇，pH约7.5)中 并在+ 37℃下孵育4小时。根据分析证书所述，在这些条件下，检测不到放射性释放。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

产品性质

质量水平	100
生物来源	Xanthomonas campestris
形式	solution
包装	pkg of 1,000 U (10674257001 [10 U/μl]) pkg of 20,000 U (10674273001 [10 U/μl]) pkg of 20,000 U (11047663001 [40 U/μl]) pkg of 5,000 U (10674265001 [10 U/μl])
manufacturer/tradename	Roche
参数	37 ℃ optimum reaction temp.
technique(s)	DNA sequencing: suitable
运输	dry ice
储存温度	−20℃

组份列表

组份不可单独销售

货号	组份
	Enzyme Solution
	SuRE/Cut Buffer H 10x concentrated

安全信息

储存分类代码	12 - Non Combustible Liquids
WGK	WGK 1
闪点(F)	does not flash
闪点(C)	does not flash