产品说明
一般描述
蛋白酶K是一种胞外内肽酶,它是由林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber)合成的。蛋白酶K属于一类新的枯草杆菌蛋白酶亚家族。它是一种277个氨基酸的蛋白质,其特征是具有未水解的蛋白质链和自溶的多肽链。
应用
在分离DNA和RNA的过程中,用于核酸酶的蛋白水解失活。
用于去除内毒素结合的阳离子蛋白,如溶菌酶和核糖核酸酶A。
据报道,其可用于分离肝、酵母和绿豆线粒体
用于测定酶在细胞膜上的定位
用于石蜡包埋组织切片的处理,暴露用于抗体标记的抗原结合位点。
用于可传播海绵状脑病(TSE)研究中朊病毒脑组织样本蛋白的消化。
来自 Sigma 的酶已被用于消化密封的胞质侧面的内质网囊泡。在 原位 杂交之前,已将其用于蜜蜂解剖脑和/或整个蛹切片的脱蛋白。这是在研究神经肽 Y 样信号,和营养介导的基因表达和行为的蜜蜂时完成的。
来自白色念球菌的蛋白酶K已被用于:
生化/生理作用
蛋白酶 K 具有广泛的特异性,即使在天然状态下也能降解许多蛋白质。主要裂解脂族和芳香族氨基酸羧基附近的肽键,带有封闭的 α-氨基。 最适 pH 在 7.5-9.0 之间 ,等电点为 8.9。激活需要 Ca 2+ (1-5 mM)。蛋白酶 K 可被 DIFP 或 PMSF 抑制。
蛋白酶K是一种稳定且具有高活性的丝氨酸蛋白酶。晶体和分子结构研究证据表明该酶属于枯草素家族,具有活性位点催化三联体(Asp39-His69-Ser224)。它在一系列广泛的环境中均稳定:pH,缓冲盐,去污剂(SDS)以及温度。 在0.1-0.5% SDS存在的情况下,蛋白酶K可保持活性,在不损害分离DNA完整性的前提下,可以消化DNA制剂中的多种蛋白质和核酸酶。
单位定义
在 pH7.5,37℃ 下,一个单位的酶将水解尿素变性血红蛋白,并产生相当于每分钟 1.0 μmol 酪氨酸的颜色(Folin-Ciocalteu 试剂的颜色)。
外形
溶于含 10 mM Tris-HCl 的 40% (v/v) 甘油 (pH 7.5) 和 1 mM 醋酸钙中。
制备说明
溶液中的蛋白酶 K 在 4.0-12.5的 pH 范围内是稳定的(最适 pH 8.0),并且在使用期间在 25℃ 至 65℃ 的温度范围内也是稳定的。在 pH 8.0,4℃ 条件下,溶液可稳定储存至少 12 个月。在 pH4-11.5,含有 Ca2+(1-6mM)条件下,溶液预计可稳定储存数周。在 4℃ 条件下,80% 硫酸铵悬浮液可稳定储存至少 12 个月。
基本信息
酶学委员会(EC)编号 | 3.4.21.64 ( BRENDA | IUBMB ) |
MDL编号 | MFCD00132129 |
eCl@ss | 32160410 |
NACRES | NA.54 |
产品性质
形式 | buffered aqueous glycerol solution |
质量水平 | 200 |
分子量 | 28.93 kDa |
浓度 | ≥10 mg/mL ≥500 units/mL |
储存温度 | 2-8℃ |
安全信息
象形图 | |
警示用语: | Danger |
危险声明 | H334 |
危险分类 | Resp. Sens. 1 |
储存分类代码 | 10 - Combustible liquids |
WGK | WGK 1 |
闪点(F) | Not applicable |
闪点(C) | Not applicable |
个人防护装备 | Eyeshields, Faceshields, Gloves, type ABEK (EN14387) respirator filter |
Sigma-Aldrich