产品说明
一般描述
Tau是一种微管结合蛋白,可稳定生长中的轴突中的微管,其会在成对的螺旋丝(PHF)中被过度磷酸化,成对的螺旋丝(PHF)是与阿尔茨海默症’相关的神经原纤维病变的主要纤维成分。Tau的过度磷酸化被认为是导致PHF组装的关键事件。已经鉴定出六种Tau蛋白同工型,所有这些同工型都可被糖原合酶激酶3(GSK 3)磷酸化。细胞和亚细胞定位:原位抗tau-1抗体对神经元轴突具有严格的特异性。该抗体不会对细胞体或神经元树突进行染色,也不会对任何其他细胞类型进行染色(4)。但是,这种体内细胞内特异性在培养中并未得到维持:抗tau-1抗体可染色培养中生长的大鼠海马神经元的轴突、细胞体和树突(5)。最初认为抗tau-1抗体的特异性代表了tau对轴突的限制性表达。后来的研究表明,这种特异性取决于磷酸化的状态。在去磷酸化的样品(用碱性磷酸酶处理的样品)中,抗tau-1抗体可对星形胶质细胞、神经胶质细胞和神经元的轴突、细胞体和树突进行染色,而在未处理的样品中,抗tau-1抗仅会染色轴突(6)。(抗tau-1抗体识别的表位可能位于磷酸化位点或附近。)
特异性
可与人、大鼠和牛脑中各种已知tau电泳形式结合(一维SDS-PAGE)。然而,克隆PC1C6存在一些未磷酸化的偏差,原因是其似乎只能识别195、198、199和202处的去磷酸丝氨酸位点(Szendrei等,1993; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi-cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=7680727)。另请参阅Billingsley & Kincaid, 1997 Biochem J 323:577-591中有关PC1C6的其他信息。
免疫原
纯化的变性牛微管相关蛋白。
应用
研究类别
神经科学
抗Tau-1抗体,克隆PC1C6,是一种抗Tau-1的抗体,可用于IH和&WB,其已有超过65次产品引用。
研究子类别
神经退行性疾病
蛋白质印迹:牛脑微管蛋白通过两个组装和拆卸循环(9)进行纯化,并溶解于SDS-PAGE样品缓冲液中。每个泳道将五微克微管样品沿着分子量标记(14.3-200 kD)一侧加上样至4%至20%SDS-PAGE梯度凝胶上。通过电泳分离后,将蛋白质印迹至硝酸纤维素上。利用大约5 ng/mL的抗tau1抗体,Tau被检测为一系列5条带(52-68 kD)。
免疫荧光:该抗体以1:1000的稀释度可在小鼠原代神经元中检测到Tau。(Basnet, N., et al. (2018).Nat. Cell Biol. 20(10); 1172-1180.
免疫组织化学: 5 μg/mL;在组织中主要染色轴突,但是在培养物中Tau的表达不仅限于轴突。
最佳工作稀释度必须由最终用户确定。
免疫组织化学实验方案
组织切片的去磷酸化(可选)
建议使用碱性磷酸酶去磷酸化以通过抗tau-1抗体对阿尔茨海默症′脑组织中神经原纤维缠结进行染色含有(6)。这种处理方法改变了抗tau-1抗体的染色模式,使其可染色包括神经元的细胞体、树突和轴突。在未经处理的样品中,抗tau-1抗仅可对轴突染色。
1.以+32°C孵育组织切片2.5小时,并在以下溶液中不断搅拌:100 mM Tris-HCl(pH 8.0);130单位/mL碱性磷酸酶、1 mM PMSF、10 μg/mL胃抑素和10 μg/mL亮肽素。
2.使用100 mM Tris-HCl(pH 8.0)洗涤切片两次,每次洗涤3分钟。
抗tau-1抗体染色
1.在含有1%(v/v)正常动物血清和0.03%(w/v)Triton X-100的PBS中孵育切片,以阻断非特异性结合。动物血清应与二抗来自同一物种。
2.用PBS洗涤3次,每次洗涤3分钟。
3.用约5 μg/mL的抗tau-1抗体孵育切片,并在含1%(v/v)正常动物血清的PBS中进行稀释。
4.用PBS洗涤,在3分钟内更换溶液3次。
5.使用标准的二抗检测系统进行含量(10-13)。
目标描述
5条带(52–68 kDa)
联系
替代品:AB1512
外形
形式:纯化
纯化的蛋白 A
0.02M磷酸盐缓冲液(pH 7.6)、0.25M NaCl和0.1%叠氮化钠
储存及稳定性
自收到之日起在-20°C可稳定保存1年。避免反复冻融。为了最大程度地回收产品,在融化后和取下盖子之前,将原始样品瓶进行离心。
分析说明
对照
阿尔兹海默症′脑组织(建议在碱性磷酸酶中进行去磷酸化以对阿尔茨海默症’脑组织中的神经原纤维缠结进行染色)或人T98G胶质母细胞瘤细胞
其他说明
浓度:请参考批次特异性浓缩物的分析证书。
法律信息
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
免责声明
除非我们的产品目录或产品附带的其他公司文档另有说明,否则我们的产品仅供研究使用,不得用于任何其他目的,包括但不限于未经授权的商业用途、体外诊断用途、离体或体内治疗用途或任何类型的消费或应用于人类或动物。
基本信息
eCl@ss | 32160702 |
NACRES | NA.41 |
产品性质
质量水平 | 100 |
生物来源 | mouse |
抗体形式 | purified antibody |
克隆 | PC1C6, monoclonal |
species reactivity | rat, bovine, human |
包装 | antibody small pack of 25 μg |
manufacturer/tradename | Chemicon® |
technique(s) | immunofluorescence: suitable immunohistochemistry: suitable western blot: suitable |
同位素/亚型 | IgG2a |
NCBI登记号 | NM_005910.3 NM_016834.2 NM_016835.2 NM_016841.2 |
UniProt登记号 | P10636 |
运输 | dry ice |
储存温度 | −20℃ |
安全信息
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 2 |
闪点(F) | Not applicable |
闪点(C) | Not applicable |
Sigma-Aldrich