产品说明
一般描述
碱性磷酸酶可催化从磷酸化的各种化合物中除去磷酸基团。来自小牛肠的碱性磷酸酶可水解来自DNA和RNA的5′-单磷酸基团。它还可以从RNA中对5′-二磷酸和5′-三磷酸基团进行水解。
应用
可使用这种小牛肠碱性磷酸酶制剂从DNA或RNA和免疫沉淀的RNA样品中去除5′-末端磷酸盐。
注意:11097075001制剂含有高浓度的酶(20 U/μl),便于大规模实验。10713023001制剂的浓度较低(1 U/μl),便于小规模实验。
序列
AP是一种含锌酶,每分子含有4个锌原子(Efstradiatis,1977)。
单位定义
一个单位的碱性磷酸酶的酶活力单位表示,其在检测条件下,在+ 37℃,1分钟内可水解1 mol 4-硝基苯基磷酸酯。
注意:根据Moessner 等的研究。5单位碱性磷酸酶(+37℃;二乙醇胺缓冲液)对应于1单位碱性磷酸酶(+25℃;甘氨酸/NaOH缓冲液)。
单位换算:约3.6 U(MB级AP)
[+37℃,4-NPP作为底物,二乙醇胺作为缓冲剂,pH 9.8] = 1U [+25℃,4-NPP作为底物,甘氨酸作为缓冲剂,pH 10.5]。
体积活力:11097075001制剂为20 U /μl。 10713023001制剂为1 U /μl。
外形
10713023001:酶溶液(1 U/μl),溶于储存缓冲液中,pH 7.6 (20 ℃)
11097075001:酶溶液(20 U/μl),溶于储存缓冲液中,pH 7.6 (20 ℃)
制备说明
工作溶液:Storage buffer: 25mM Tris-HCl,1mM MgCl2,0.1mM ZnCl2,甘油50%(v/v),pH 7.6(4℃)。
储存条件(工作溶液):储存缓冲液中的MB级AP稀释液(1至5 U/μl)在2至8℃下可稳定保存17个月。
较高的稀释度(~0.01 U/μl)应每天新鲜配制,并保存在2至8℃。
在克隆过程中防止载体的自我连接
如果线性化载体缺乏5′磷酸,则不能与自身连接或形成含有多个载体拷贝的连环体。因此,连接反应的产物主要则为重组DNA(载体+DNA插入物),而不会是重新连接的质粒。
失活:向反应混合物中加入1/10体积的EGTA,并在+65℃下孵育10分钟。为确保酶完全失活,可通过苯酚/氯仿/异戊醇对混合物进行抽提以除去所有蛋白质。
其他说明
用于一般实验室用途。
基本信息
酶学委员会(EC)编号 | 3.1.3.1 ( BRENDA | IUBMB ) |
产品性质
质量水平 | 100 |
生物来源 | bovine (calf) intestine |
形式 | solution |
specific activity | 2 units/μg protein |
包装 | pkg of 1,000 U (10713023001 [1 U/μl]) pkg of 1,000 U (11097075001 [20 U/μl]) |
manufacturer/tradename | Roche |
参数 | 37 ℃ optimum reaction temp. |
最佳pH | 7.5-9.5 |
运输 | wet ice |
储存温度 | 2-8℃ |
安全信息
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 1 |
闪点(F) | does not flash |
闪点(C) | does not flash |
Sigma-Aldrich