产品说明

一般描述

一步法 RT-PCR 是一种非常灵敏的技术，用于确定 RNA 模板的存在与否，或通过 RNA转录水平的定性、半定量或定量分析来量化表达水平(例如，用于病毒水平定量)。该 RT-PCR 方法还有助于扩增用于克隆的极少量的模板。一步法形式十分方便，反应间差异性降低，并通过最大限度减少手动操作，防止污染。
Transcriptor 一步法 RT-PCR 试剂盒提供具有突出优势的 Transcriptor 反转录酶，以及优异的热启动一步法 RT-PCR 形式。
对于热启动一步法 RT-PCR，利用 Transcriptor 反转录混合物、Protector RNA 酶抑制剂和扩展系统，以及创新型热启动缓冲液(正在申请专利)。
Transcriptor 一步法 RT-PCR 试剂盒便利地提供一步法 RT-PCR(引物和模板除外)所需的所有组件。50 个反应包装尺寸还包含 10 个对照反应(对照 RNA 和对照引物混合物)。
该试剂盒的 RT-PCR 酶混合液含有 4 种不同的酶：Transcriptor 反转录酶确保了高产量、高灵敏，以及强力的转录；Protector RNA 酶抑制剂，在高温下完全保持活化，在反转录过程中给模板提供最大程度的保护；和扩展系统——由 Taq DNA 聚合酶和校正聚合酶组成的混合物——最大限度地降低突变的可能性，确保 PCR 的高产量和保真度。
优化的 RT-PCR 反应缓冲液包含高质量的 dNTP，并提供整体性能改善的热启动系统。缓冲液独特的热启动组分在较低温度下结合并隔离引物，防止引物与非特异性位点结合。另一种组分以温度依赖性方式结合镁离子，防止不受控的 DNA 合成。这种新型缓冲液配方在反转录和 PCR 过程中均有效，从而提高了特异性和灵敏度。
优化的反应缓冲液和酶混合物联合使用确保了有复杂的二级结构和高 GC 含量的难度模板在不提高反应温度的情况下实现高效转录。

应用

Transcriptor 一步法 RT-PCR 试剂盒设计用于使用基因特异性引物对 RNA(总 RNA、mRNA、体外转录的 RNA 或病毒 RNA)进行快速、灵敏、特异的终点 RT-PCR 分析。
该试剂盒的特色是一种创新型反应缓冲液，并结合了高灵敏、高产的逆反转录和性能改善的热启动系统，适用于高保真、高效地扩增多种模板，甚至是富含 GC 的 RNA 模板。
该试剂盒提供了一种方便、高灵敏度的一步法 RT-PCR 方法，可生成高达 6.5 kb 的转录本，适用于以下应用：

• RNA 转录水平的定性、半定量或定量分析
• 确定 RNA 模板的存在与否
• 通过 RNA 分析定量基因表达(例如，用于病毒水平定量)
• 克隆高达 6.5 kb 的 RNA

该一步法形式十分方便，减少了反应间的变化，并通过最大限度减少手动操作，防止污染。
转录因子一步 RT-PCR 试剂盒已用于扩增：

• 丙型肝炎病毒(HCV)片段
• 重链 CH3 区和轻链聚A区
• 鼠白血病病毒(MLV)

特点和优势

• 在宽扩增范围内获得高灵敏度和高产量：

检测少至 1fg 的总 RNA。

• 实现高特异性并减少引物二聚体

该试剂盒的专利热启动缓冲液(正在申请专利)确保了卓越的性能。

• 产生长片段：

可生成高达 6.5 kb 的转录本。

• 可转录各种模板，即使是最困难的模板(例如，富含 GC 的 RNA)：

使用热稳定 Transcriptor 反转录酶结合优化的缓冲液克服模板中复杂的二级结构。

• 使用该便利的试剂盒节省时间并改善结果：

通过使用预混合酶混合物和优化的缓冲液(包含 PCR 级 dNTP 和热启动组件)，最大限度地减少移液步骤并防止污染。

• 保护您的 RNA 样本：

使用提供的热稳定 Protector RNA 酶抑制剂保护您的 RNA 不被 RNA 酶降解，在一步法 RT-PCR 期间，当其他 RNA 酶抑制剂失效时，该抑制剂仍可发挥作用。

• 增强对结果的信心：

使用提供的对照反应监测 RT-PCR 效果。

组分

• 含有 Transcriptor 反转录酶，Protector RNA 酶抑制剂，以及 Expand System 的 RT-PCR 酶混合物
• 含有热启动介导的组分和 dNTP 的 RT-PCR 反应缓冲液——5x 浓缩液
• 水，PCR 级
• 对照 RNA——HAV RNA，体外转录本*
• 对照引物混合物 HAV RNA(正向和反向引物)*

*仅在 5 0 个反应包装尺寸中提供。

质量

每批 Transcriptor 一步法 RT-PCR 试剂盒均进行过 RT-PCR 功能测试。也使用 1000 拷贝的 HAV RNA，体外转录本(也以产品号 04 655 877 001 提供)进行了 RT-PCR。使用包装说明书中提供的标准 RT-PCR 实验方案(在 +50℃ 下，反转录 30 分钟)进行了对照反应设置，并随后用 246bp HAV RNA 片段的引物的进行了 RT-PCR。使用 1,000 拷贝的靶标，在琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色后获得清晰可见的条带。
此外，使用一系列稀释的人肝脏总 RNA(10ng、1ng 和 0.1ng)进行 RT-PCR。使用包装说明书中提供的标准 RT-PCR 实验方案(在 +50℃ 下，反转录 30 分钟)，使用针对 2.5kb ApoB 片段的特异性引物进行了 RT-PCR。使用 1ng RNA，在琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色后获得清晰可见的条带。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
反转录酶概述

产品性质

用途	sufficient for 150 reactions sufficient for 50 reactions
质量水平	100
特点	hotstart: no
manufacturer/tradename	Roche
包装	pkg of 150 reactions (04655885001) pkg of 50 reactions (04655877001)
technique(s)	RT-PCR: suitable RT-qPCR: suitable
input	purified RNA
detection method	probe-based

安全信息

危险声明	H412
预防措施声明	P273 - P501
危险分类	Aquatic Chronic 3
储存分类代码	12 - Non Combustible Liquids
WGK	WGK 2
闪点(F)	does not flash
闪点(C)	does not flash